研究根据罗湖病毒（Tilapia lake virus，TiLV）编码RNA聚合酶的基因片段1设计1对特异性引物和探针，建立一种检测TiLV的实时荧光定量RT-PCR（RT-qPCR）方法，并对该检测方法进行了反应体系和条件优化。结果表明，优化的20 μL反应体系： 2×Probe RT-PCR Master Mix 10 μL，QN Probe RT-Mix 0.2 μL，5 μmol/L的引物TiLV-qF、TiLV-qR、探针TiLV-qP各1 μL，模板1 μL，补充RNase-free water至20 μL。优化的反应条件：反转录45℃ 20 min；预变性95℃ 5 min；扩增95℃ 15 s，60℃ 1 min，40个循环。荧光收集设置在60℃退火延伸时进行。本文建立的RT-qPCR方法检测TiLV的特异性好，重复性好，灵敏度高，灵敏度为2.5×10 ^-8 ng/μL，可为TiLV的监测和预防提供技术支撑。